Genexpression von Gas2L 1 und Gas2 in Podozyten unter Einfluss von advanced Glycation Endproducts

Hause, Stephan

Die diabetische Nephropathie (DN) tritt zuerst durch die Schädigung von Glomeruli und dort primär der Podozyten in Erscheinung. Dabei spielen Advanced Glycation Endproducts (AGE) eine entscheidende Rolle. Diese wirken u.a. über spezielle Rezeptoren (z.B. RAGE). In der vorliegenden Arbeit wurde die Schädigung der Podozyten unter dem Einfluss der AGEs in Bezug auf zwei Gene untersucht: Growth Arrest Specific 2 (GAS2) und Growth arrest specific 2 like 1 (GAS2L1). Für in vitro Versuche wurden differenzierte Podozyten, für in vivo-Analysen Mäuse mit genetisch bedingtem Diabetes Typ 2 verwendet (db/db Mäuse). In mit AGE behandelten Podozyten konnte in der Real-time PCR eine nicht signifikante Steigerung der GAS2L1 mRNS beobachtet werden. Die in Podozyten gezeigten Effekte konnten über eine Blockierung von RAGE reduziert werden. GAS2L1 war in den Nieren von db/db-Mäusen im Vergleich zu Kontrolltieren signifikant erhöht. Die in situ Hybridisierung zeigte für GAS2L1α eine leichte Erhöhung der Expression, was die Real Time PCR Daten bestätigten. Die Überexpression von GAS2L1 zeigte im Caspase Glo Assay keine Hinweise auf eine gesteigerte Apoptoserate in den transfizierten Podozyten. GAS2 mRNS war unter AGE-Einfluss signifikant erhöht. Dieser Effekt war reversibel bei Blockierung des RAGE. In diabetischen Mäusen wurde kein signifikanter Anstieg gemessen. Im Western Blot konnten die RNS-Effekte auch für GAS2-Protein bestätigt werden. Die immunhistochemische (IHC)-Untersuchung von GAS2 in Podozyten zeigte eine Erhöhung des GAS2 Proteins unter AGE-Einfluss. Diese Veränderungen waren reversibel durch RAGE-Blockade. Die IHC-Analyse des GAS2-Proteins in diabetischen Mäusen zeigte eine relativ stärkere glomeruläre Expression. Eine Erhöhung von GAS2L1α, GAS2 und GAS2-Protein unter AGE bzw. diabetischen Bedingungen konnte somit in vitro und in vivo nachgewiesen werden. In vitro zeigte sich eine Abhängigkeit vom Rezeptor RAGE.

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Hause, Stephan: Genexpression von Gas2L 1 und Gas2 in Podozyten unter Einfluss von advanced Glycation Endproducts. 2015.

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