Assoziierte Proteine und regulatorische Funktionen des CCAAT-Bindekomplexes in Aspergillus nidulans

Tuppatsch, Katja

Der CCAAT-Bindekomplex (CBC) ist ein globaler transkriptioneller Regulator in eukaryotischen Zellen. Der CBC besteht aus drei hochkonservierten Untereinheiten. Die entsprechenden Untereinheiten des Modellpilzes Aspergillus nidulans wurden HapB, HapC und HapE genannt. In den letzten Jahren wurden eine Reihe von CBC-regulierten Prozessen aufgeklärt und abhängige Gene identifiziert. Einen vertieften Einblick in die Funktionsweise des CBCs ergab die Strukturaufklärung des CBC/DNA-Komplexes. Diese Arbeit liefert neue Erkenntnisse über CBC-regulierte Prozesse, CBC-assoziierte Proteine und dessen mögliche Rolle in der Positionierung von Nukleosomen und damit als Organisator von Promotoren. Mittels Koimmunopräzipitation wurde ein neues, mit dem CBC-assoziiertes Protein unbekannter Funktion identifiziert, das als HapY bezeichnet wurde. Es handelt sich um ein für Ascomyceten spezifisches HMGA-ähnliches Protein. Mit seiner AT-hook-Domäne bindet es vermutlich spezifische CCAAT-Promotorbereiche, deren benachbarte Regionen AT-reich sind, wodurch die DNA-Bindungsaffinität des CBCs erhöht wird. Bisher ist ungeklärt, welche Gene durch den CBC/HapY-Komplex reguliert werden, denn eine Deletion des Gens zeigte unter den hier getesteten Bedingungen keinerlei Effekte. Bimolekulare Fluoreszenz Komplementationsanalysen bestätigen eine in vivo-Interaktion zwischen dem CBC und HapY. Eine Interaktion des CBC mit der Histon-Acetyltransferase GcnE konnte für A. nidulans weder in vitro noch in vivo nachgewiesen werden, obwohl die Phänotypen der Deletionsmutanten von gcnE und hapC identisch sind. Zudem wurden in dieser Arbeit vergleichende Proteomanalysen durchgeführt, um den Einfluss der Inaktivierung des CBCs auf das Proteom von A. nidulans zu untersuchen. 35 differentiell synthetisierte Proteine spiegeln die phänotypischen Eigenschaften der ∆hapC-Mutante wider, welche Defekte in Wachstum und Entwicklung aufweist und sensitiv gegen oxidativen Stress ist.

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Tuppatsch, Katja: Assoziierte Proteine und regulatorische Funktionen des CCAAT-Bindekomplexes in Aspergillus nidulans. 2015.

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