Charakterisierung von polyklonalen Antikörpern gegen humanes Spastin

Ehms, Franziska

In dieser Arbeit werden zwei neue polyklonale Antikörper gegen das humane Protein Spastin charakterisiert. Das Protein Spastin wurde bei der Erforschung der molekularen Prozesse im Zusammenhang mit der hereditären spastischen Paraplegie (HSP) entdeckt. In der bisherigen Forschung zur Funktion und Lokalisation des Proteins Spastin sind voneinander abweichende Aussagen getroffen worden. Dabei führte der Einsatz unterschiedlicher Antikörper zu verschiedenen Ergebnissen. Als Methoden zur Bestimmung der spezifischen Detektion des Proteins Spastin mit den neuen polyklonalen Antikörpern wurden der Western Blot und die Immunzytochemie gewählt. Beide Methoden ermöglichten die Beurteilung der effektiven Antikörperfunktion durch die Färbung von überexprimierten und nativen Spastin in unterschiedlichen humanen Zelllinien (HeLa-, HEK-293-Zellen) durch den Antikörper. Die Bestimmung der Spezifität erfolgte durch den Vergleich von Immunserum mit dem Präimmunserum, sowie durch die kompetitive Präinkubation mit dem Antigen (Spastinpeptid). Die Ergebnisse zeigen, dass Antikörper A801K sowohl in dem Antiserum des Tieres C7771 als auch des Tieres C7772 das überexprimierte Protein Spastin im Western Blot erkennt. In der Immunzytochemie wird nur durch Antikörper A801K TierC7772 die Färbung von überexprimierten Spastin in transfizierten Zellen gezeigt, während Antikörper A801K TierC7771 das überexprimierte Protein nicht erkennt. Endogenes Spastin kann im Western Blot aus nativen Homogenaten nicht nachgewiesen werden, da natives Spastin vermutlich unter der Nachweisgrenze für den Western Blot liegt. Eine Empfehlung für den Einsatz des Antikörper A801K kann daher nur eingeschränkt auf die Detektion von überexprimierten Spastin gegeben werden. Antikörper A802K zeigt keine Färbung des Proteins Spastin im Western Blot und in der Immunzytochemie, so dass keine Empfehlung zum weiteren Einsatz in der Forschung gegeben werden kann.

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Ehms, Franziska: Charakterisierung von polyklonalen Antikörpern gegen humanes Spastin. 2009.

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